ABSTRAK
Ikan sturgeon Adriatik, Acipenser naccarii , adalah spesies endemik di cekungan Laut Adriatik yang diklasifikasikan sebagai sangat terancam punah menurut Daftar Merah IUCN. Informasi terbatas tersedia mengenai status kesehatan dan penyakit yang memengaruhi spesies ini, khususnya di alam liar. Pada bulan September 2023, seekor ikan sturgeon Adriatik betina pasca-pemijahan ditemukan di sepanjang tepi Sungai Adige. Ikan itu menunjukkan cara berenang yang tidak normal, pendarahan kulit, kekurusan yang ekstrem, dan mati tak lama setelah ditemukan. Saat otopsi, lambung tampak membesar dengan tekstur yang keras dan pembatasan lumen yang parah karena penebalan dinding lambung. Leiomioma lambung ditandai dengan histologi, dan ini merupakan deskripsi pertama dari neoplasia semacam itu di A. naccarii . Di usus, infestasi parah dengan cacing gelang yang termasuk dalam filum Acanthocephala bertanggung jawab atas enteritis hemoragik yang parah. Parasit tersebut diidentifikasi sebagai spesies Leptorhynchoides polycristatus , yang merupakan deskripsi pertama parasit semacam itu di Italia. Akhirnya, analisis genetik dilakukan untuk menilai kemurnian genetik dan keterkaitan dengan stok hasil penangkaran. Hasil penelitian menunjukkan bahwa individu tersebut tidak berkelompok dengan kelompok yang diidentifikasi dalam penangkaran, yang mendukung kemungkinan bahwa itu adalah ikan sturgeon Adriatik yang murni dan berasal dari alam liar.
1 Pendahuluan
Ikan sturgeon Adriatik, Acipenser naccarii Bonaparte 1836, adalah spesies endemik di cekungan Laut Adriatik dan saat ini diklasifikasikan sebagai Sangat Terancam Punah menurut Daftar Merah Persatuan Internasional untuk Konservasi Alam (IUCN). A. naccarii yang dulunya melimpah di sungai-sungai Italia, kini mengalami penurunan populasi yang parah akibat hilangnya habitat, pengaturan sungai, polusi, dan penangkapan ikan yang berlebihan. Ikan ini dikenal secara nasional karena signifikansi ekologis dan evolusinya, di samping kepentingan tradisionalnya di beberapa wilayah yang terkait dengan produksi kaviar. Kecuali beberapa bukti terbaru tentang reproduksi yang terjadi di alam liar (Congiu et al. 2021 ), kelangsungan hidup spesies ini sebagian besar bergantung pada program restocking yang dilakukan dengan melepaskan juvenil yang dihasilkan dari indukan dewasa yang dibesarkan di tempat akuakultur. Faktanya, dalam beberapa tahun terakhir, beberapa upaya restocking telah didukung oleh proyek-proyek Uni Eropa (misalnya, LIFE04 NAT/IT/000126; LIFE03 NAT/IT/000113) dengan melepaskan ikan sturgeon yang diberi tanda secara individual di perairan Italia (Arlati dan Poliakova 2008 ; Barca et al. 2022 ). Untuk memantau kemurnian pembiak yang digunakan dalam program restocking serta untuk memantau kemungkinan fenomena perkawinan sedarah, silsilah genetik semua ikan sturgeon Adriatik yang ditangkarkan di Italia sudah diketahui (Barca et al. 2022 ; Boscari dan Congiu 2014 ). Lebih jauh lagi, untuk alasan yang sama, setiap populasi ex situ harus diselidiki secara genetis untuk menentukan apakah itu adalah sampel representatif dari keragaman genetik yang tersedia atau dapat mewakili kemungkinan pengayaan stok genetik yang sudah diketahui (Christie et al. 2012 ; Doukakis et al. 2010 ; Russello dan Amato 2004 ; Theodorou dan Couvet 2010 ). Selain ancaman yang sudah diidentifikasi terhadap spesies seperti perburuan liar, bendungan, polusi dan spesies invasif, sangat sedikit informasi yang tersedia mengenai penyakit yang dapat mempengaruhi spesies ini. Bigarré et al. ( 2017 ) melaporkan deteksi Acipenser Iridovirus-European (AcIV-E) dalam sampel sturgeon Adriatik yang dikumpulkan pada tahun 2014 dari ikan dewasa yang dibudidayakan yang menunjukkan tanda-tanda klinis. Demikian pula, Bondavalli et al. ( 2024 ) mendeteksi AcIV-E pada tahun 2022 dan 2023 dalam sampel sturgeon Adriatik yang dikumpulkan setelah kejadian kematian di peternakan sturgeon yang terletak di Italia barat laut. Temuan ini sangat menunjukkan kerentanan sturgeon Adriatik terhadap infeksi AcIV-E, yang kemudian dapat menjadi ancaman bagi spesies tersebut sebagaimana telah didokumentasikan untuk spesies sturgeon lainnya (khususnya untuk Acipenser gueldenstaedtii). Sebaliknya, beberapa spesies bakteri telah dilaporkan menyebabkan penyakit pada ikan sturgeon Adriatik yang dibudidayakan, khususnya Aeromonas hydrophila (Santi et al. 2019 ) dan Streptococcus iniae (Mugetti et al. 2022 ). Khususnya, yang terakhir menyebabkan kematian yang signifikan dalam kasus yang dilaporkan, yang menyebabkan antara 6,4% dan 11,2% kematian bulanan. Semua laporan ini merujuk pada ikan sturgeon Adriatik yang dibudidayakan, karena wabah di alam liar sangat sulit diidentifikasi dan diselidiki. Untuk alasan ini, sangat berharga untuk menyelidiki setiap kejadian kematian sturgeon liar yang dilaporkan. Oleh karena itu, penelitian ini menggambarkan temuan klinis dan anatomopatologis serta hasil laboratorium dari kasus penyakit yang melibatkan spesimen dewasa ikan sturgeon Adriatik yang diambil di Italia di alam liar.
2 Deskripsi Kasus
Pada bulan September 2023, seekor ikan sturgeon Adriatik dewasa berukuran panjang standar 140 cm ditemukan dalam kondisi tertekan di Italia timur laut di sepanjang tepi Sungai Adige, dekat muaranya. Tidak ada kondisi cuaca buruk yang dilaporkan selama 2 minggu sebelumnya serta kejadian hidrologi atau anomali air lainnya yang relevan. Suhu air rata-rata 26°C dan salinitas 25 ppt saat ikan tersebut diamati. Keberadaan spesies akuatik lainnya seperti belanak dan kepiting biru yang tidak terpengaruh oleh penyakit apa pun dilaporkan di sungai yang sama. Ikan tersebut menunjukkan gaya berenang yang tidak normal (berselancar dan bertabrakan dengan tepian sungai), beberapa pendarahan kulit, dan kekurusan yang ekstrem. Karena relevansi ekologis spesies tersebut, penyelamatan subjek dengan menangkapnya dan memasukkannya ke dalam tempat akuakultur sturgeon komersial dicoba. Sayangnya, hewan tersebut mati beberapa jam setelah pengangkutan dan bangkainya dibekukan selama 2 minggu sebelum dikirim ke laboratorium untuk diautopsi.
3 Pemeriksaan Anatomopatologi
Ikan tersebut dicairkan dan diotopsi sesuai dengan prosedur standar. Spesimen tersebut terbukti sebagai ikan betina dewasa, sebagaimana dikonfirmasi juga oleh pemeriksaan gonad dengan sediaan basah. Panjang standar (SL) adalah 140 cm, sedangkan panjang total adalah 150 cm. Berat ikan tersebut 13,5 kg dan indeks K dihitung menurut rumus berikut oleh Fulton ( 1904 )
Meskipun tidak distandarkan untuk sturgeon Adriatik, nilai K sebesar 0,5 mengindikasikan status gizi yang buruk, yang dikonfirmasi oleh kekurusan yang terlihat pada pemeriksaan kasar. Tidak ada tanda yang ditemukan yang menunjukkan bahwa ikan tersebut tidak berasal dari kegiatan penebaran kembali. Melalui pemeriksaan eksternal, dapat diamati lesi erosif dengan hilangnya jaringan khususnya pada tingkat sirip ekor. Seperti yang dilaporkan oleh para pemancing, beberapa kepiting biru terlihat memakan tubuh sturgeon, dan lesi ini mungkin terkait dengan keberadaan mereka. Tidak ada lesi eksternal lain yang terlihat. Secara internal, dapat diamati sedikit kolikasi dan kongesti hati yang disertai dengan pembesaran kandung empedu yang parah yang sesuai dengan kelaparan. Dinding ventrikel jantung terbukti lebih tipis dari yang diharapkan. Lambung tampak sebagai massa yang keras dengan konsistensi semi-elastis dan seukuran buah delima. Setelah sayatan melintang, dapat diamati penebalan dinding yang parah dan adanya massa dengan warna dan tekstur yang sama dengan jaringan dinding yang menonjol di lumen lambung. Oklusi lumen lambung yang hampir lengkap diamati
Seluruh usus tampak sangat tersumbat (Gambar 2A ). Setelah dibuka, mukosa usus tampak hemoragik dan sangat menebal. Di bagian anterior usus sebelum katup spiral, infestasi cacing gelang yang sangat banyak terdeteksi dengan sedikitnya 104 individu yang terhitung
Tidak ada lesi internal lain yang terdeteksi. Berdasarkan temuan kasar, penyakit ini terkait dengan penyumbatan lambung dan infestasi parasitologi yang masif. Karena penyimpanan beku yang lama dan tidak ada kecurigaan penyakit menular, tidak ada pengambilan sampel yang dilakukan untuk analisis bakteriologi.
4 Analisis Virologi
Meskipun tidak ada penyakit menular yang dicurigai, pengambilan sampel untuk analisis virologi dilakukan guna mengumpulkan data mengenai prevalensi infeksi virus pada ikan sturgeon Adriatik. Pada saat nekropsi, sampel insang dikumpulkan dan diuji untuk deteksi AcIV-E dengan qPCR menurut protokol yang dijelaskan oleh Bigarré et al. ( 2017 ) dan dengan isolasi virus pada lini sel WSSK-1 untuk virus herpes Acipenser menurut protokol yang dijelaskan oleh Ciulli et al. ( 2020 ). Kedua analisis tersebut menghasilkan hasil negatif.
5 Analisis Parasitologi
Parasit usus diperiksa melalui sediaan basah dan dipastikan termasuk dalam filum Acanthocephala. Beberapa spesimen difiksasi dalam etanol 70% atau formalin buffer 10% untuk diproses lebih lanjut.
Untuk pengamatan dalam mikroskop cahaya, parasit yang difiksasi etanol diklarifikasi dalam laktofenol Amman dan diukur menggunakan Kamera digital Nikon dan perangkat lunak Pencitraan NIS-Elements–Nikon mengikuti kunci yang dilaporkan oleh Amin et al .
Pengukuran (dalam mm kecuali dinyatakan lain) diberikan sebagai rentang (min–maks) diikuti oleh rata-rata dan simpangan baku. Pengukuran lebar mengacu pada bagian tubuh yang paling lebar
Untuk analisis mikroskop elektron pemindaian (SEM), spesimen yang difiksasi formalin dicuci tiga kali dalam buffer fosfat, didehidrasi melalui seri etanol bertingkat, mengalami pengeringan titik kritis, dilapisi dengan emas paladium dan diamati menggunakan Phenom XL G2 Desktop SEM (Thermo Fisher Scientific, Eindhoven, Belanda) yang beroperasi pada 5 kV. Karakter morfologi dan morfometri seperti yang ditentukan dalam mikroskop elektron cahaya dan pemindaian konsisten dengan deskripsi Leptorhynchoides polycristatus yang menjadi parasit pada ikan sturgeon Acipenser spp. dari Laut Kaspia (Amin et al. 2013 ). Fitur morfologi yang diamati adalah sebagai berikut: batang tubuh silindris, ramping, meruncing ke kedua ujung, lebih bulat di posterior. Belalai panjang dan sedikit bengkak di anterior (Gambar 3A ), dengan 12–14 baris longitudinal yang masing-masing terdiri dari 19 kait. Kait apikal lebih kecil dan lebih melengkung (Gambar 3B ), kait tengah lebih panjang (Gambar 3C ); kait pangkal sedikit mengecil panjangnya dan kurang melengkung. Permukaan kait dengan garis-garis membujur dan kerah kutikula di sekitar pangkal (Gambar 3D ). Lemnisci panjang, ramping, tidak sama (Gambar 3E ). Sistem reproduksi betina sederhana; gonopore dekat terminal; telur memanjang, halus, berbentuk gelendong (Gambar 3H ). Tabel 1 merangkum ukuran morfometrik spesimen yang dianalisis.
Spesies L. polycristatus belum pernah dilaporkan di Italia, sedangkan spesies lain yang sejenis, Leptorhynchoides plagicephalus , sebelumnya telah dilaporkan (Foata et al. 2004 ; Rossi et al. 1992 ) dan berhubungan dengan penurunan kinerja pertumbuhan pada A. naccarii yang sangat terpengaruh (Rossi et al. 1992 ). Kedua spesies ini berbeda dalam sejumlah fitur morfologi: jumlah kait/baris (19–20 vs. 22–24), lebar telur (jauh lebih rendah pada L. polycristatus ), posisi kait terpanjang (anterior pada L. plagicephalus , tengah-belalai pada L. polycristatus ), keberadaan kerah kutikula di sekitar pangkal kait dan kerah batang kutikula (fitur yang tidak ada pada L. plagicephalus ) (Amin et al. 2013 ). Pada spesimen kami, kerah batang kutikula tidak diamati; Namun, seperti yang ditunjukkan dalam deskripsi asli L. polycristatus , fitur ini mungkin tidak mudah dibedakan atau diamati secara konsisten (Amin et al. 2013 ).
6 Histologi
Pada nekropsi, sampel jantung, limpa, ovarium dan lambung dikumpulkan dan difiksasi dalam formalin buffer netral 10% hingga diproses lebih lanjut. Sampel kemudian didehidrasi melalui seri etanol–xilena bertingkat dan ditanamkan dalam parafin. Potongan 3 μm pertama-tama dideparafinisasi, direhidrasi dan kemudian diwarnai dengan hematoksilin–eosin (H&E) untuk pemeriksaan morfologi. Limpa, jantung dan ovarium menunjukkan fenomena autolitik yang luas karena proses pembekuan–pencairan. Namun, di ovarium, dimungkinkan untuk mengidentifikasi oosit primer dan previtelogenik yang menunjukkan gonad aktif. Pemeriksaan histologis lambung mengungkapkan lesi proliferatif yang melibatkan dinding lambung dan dibentuk oleh serat otot polos yang berorientasi pada bidang yang berbeda dan berdiferensiasi baik. Tidak ada atipia sel dan aktivitas mitosis terbatas yang terdeteksi (Gambar 4C ). Massa proliferatif berkembang secara eksentrik ke lumen lambung dan ditutupi oleh serosa (Gambar 4B ). Berdasarkan aspek histologis, lesi proliferatif sesuai dengan leiomyoma.
7 Analisis Genetik
Analisis genetik dilakukan untuk mencoba menilai asal spesimen (liar atau penangkaran). Biopsi sirip dilakukan secara in vivo saat spesimen dipindahkan ke pabrik akuakultur, dan DNA diekstraksi menggunakan DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen), mengikuti ‘Quick-Start Protocol’ untuk jaringan. Selanjutnya, DNA disimpan pada suhu -20°C hingga dilakukan analisis lebih lanjut.
Kemurnian individu dideteksi dengan menganalisis seluruh wilayah kontrol mitokondria. Wilayah ini diperkuat, dimurnikan, dan diurutkan seperti yang dijelaskan dalam Congiu et al. ( 2011 ). Berdasarkan perbandingan dengan haplotipe yang telah diketahui untuk spesies ini, setiap polimorfisme diperiksa secara manual pada kromatogram menggunakan MEGAX (Kumar et al. 2018 ), dan analisis Blast cocok dengan haplotipe A. naccarii 3. Pengujian lebih lanjut menggunakan penanda nuklir spesifik spesies (Barmintseva dan Mugue 2013 ; Boscari, Barmintseva, et al. 2014 ) mengonfirmasi kemurnian hewan tersebut.
Untuk menentukan asal spesimen dari alam liar atau penangkaran, analisis keterkaitan dilakukan antara individu dan stok penangkaran Italia, yang merupakan asal semua sturgeon Adriatik yang digunakan dalam program restocking nasional. Tujuh belas lokus mikrosatelit diperkuat mengikuti kondisi yang dilaporkan oleh Barca et al. ( 2022 ) dan produk PCR digenotipe di BMR Genomics (layanan eksternal, Padova, Italia, https://www.bmr-genomics.it/ ). Penilaian alel dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak GENEMARKER v. 1.95 (SoftGenetics LLS) dan individu berhasil digenotipe di 12 lokus mikrosatelit .
Penugasan parental dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak BreedingSturgeons (Boscari, Pujolar, et al. 2014 ), yang secara khusus dikembangkan untuk spesies sturgeon tetraploid. Dua algoritma berbeda diterapkan: ukuran pembagian pita standar dan estimasi tertimbang dari alel pemisah dari berbagai kemungkinan pasangan parental dan putative descent. Spesimen tersebut tidak ditugaskan ke pasangan parental mana pun, yang menunjukkan asal usul liar. Namun, karena beberapa hewan dari stok referensi asli tidak ada dalam basis data kami, tidak mungkin untuk secara definitif mengesampingkan bahwa hewan tersebut dihasilkan di penangkaran menggunakan setidaknya satu hewan yang tidak dikenal, meskipun ini merupakan kejadian yang sangat tidak mungkin. Oleh karena itu, untuk lebih jauh mengeksplorasi potensi asal usul liar dari spesimen yang sedang diperiksa, analisis penskalaan multidimensi (MDS) dilakukan untuk memvisualisasikan jarak genetik berpasangan di antara individu dan hewan penangkaran lain yang tidak ditugaskan dengan haplotipe yang sama. Hasilnya (Gambar 5 ) menunjukkan bahwa individu tersebut tidak mengelompok dengan kelompok hewan yang tidak dialokasikan. Selain itu, keberadaan alel unik mendukung kemungkinan asal usul yang liar.
8 Diskusi
Penyakit menular termasuk di antara ancaman terhadap pemulihan populasi sturgeon. Sayangnya, sangat sedikit laporan tentang berbagai patogen yang memengaruhi Acipenser spp. dan A. naccarii secara khusus yang tersedia dalam literatur. Hal ini karena sturgeon secara umum dianggap sebagai spesies ikan yang kuat yang hanya terpengaruh oleh sedikit patogen, terutama selama tahap dewasa yang panjang. Keyakinan ini, ditambah dengan kelangkaan metode diagnostik khusus secara keseluruhan (yaitu uji molekuler untuk penyakit virus), membuat laporan penyakit pada spesies ini jarang terjadi (Mugetti et al. 2020 ). Dalam kasus khusus ini, tidak ada patogen virus yang terdeteksi dan tidak ada analisis bakteriologis yang memungkinkan karena penyimpanan beku yang lama. Namun, tidak ada lesi kasar yang mengacu pada penyakit bakteri yang diamati. Hasil analisis laboratorium memungkinkan identifikasi penyebab kematian yang paling mungkin yang terkait dengan penyumbatan lumen lambung yang hampir lengkap yang pasti menyebabkan ketidakmampuan makan. Karena ukuran massa dan status kurus kering ikan, proses kronis telah diduga. Infestasi besar-besaran oleh L. polycristatus semakin memperburuk kekurangan gizi. Ini merupakan deskripsi pertama infestasi dengan L. polycristatus di Italia, yang memberikan informasi berharga tentang parasitofauna ikan sturgeon Adriatik.
Ikan sturgeon sangat rentan terhadap neoplasia karena rentang hidup mereka yang lebih panjang, tetapi sangat sedikit kasus yang dilaporkan. Tabel 2 merangkum informasi yang tersedia dari literatur. Deteksi pertama melibatkan dua spesimen Acipenser transmontanus yang belum dewasa yang ditempatkan di akuarium kota. Kedua ikan menunjukkan lesi kulit yang terletak di tingkat sirip dan di bagian ventral tubuh. Lesi didiagnosis sebagai papiloma dan dikaitkan dengan rangsangan mekanis karena kontak ikan dengan dinding akuarium (Honma et al. 1999 ). Rezaie et al. ( 2018 ) menggambarkan fitur histologis hemangioma kavernosa kardiak yang diamati pada Acipenser baerii yang belum dewasa yang sakit . Investigasi laboratorium tidak dapat menjelaskan tanda-tanda klinis yang meliputi malformasi rangka, kekurusan parah, eksoftalmosis, dan ulkus kulit. Namun, laporan tersebut merupakan deteksi pertama neoplasia tersebut pada ikan sturgeon Siberia. Rahmati-Holasoo et al. ( 2018 ) melaporkan fitur klinis, pencitraan dan histopatologi nefroblastoma yang terjadi pada hibrida Huso huso × Acipenser ruthenus . Ikan juvenil menunjukkan distensi abdomen monolateral atau bilateral dengan prevalensi 1%. Pada semua ikan yang diperiksa saat nekropsi, rongga selom menunjukkan adanya massa besar yang meliputi sebagian besar organ visceral, termasuk kandung kemih renang. Berdasarkan temuan histologis dan imunohistokimia, massa didiagnosis sebagai nefroblastoma. Meskipun tidak dapat mengidentifikasi etiologi neoplasia, karsinogenesis kimia atau pengaruh genetik diduga. Baru-baru ini, tumor selubung saraf kulit dilaporkan pada ikan sturgeon Rusia yang dibudidayakan, A. gueldenstaedtii (Mandrioli et al. 2025 ). Dalam kasus ini, ikan dewasa yang belum dewasa menunjukkan beberapa massa kulit pada tingkat sirip. Seperti pada laporan sebelumnya, perkembangan neoplasia diduga terkait dengan penyebab genetik atau rangsangan mekanis.
Mengacu pada massa dalam penelitian ini, secara histologis diidentifikasi sebagai leiomioma, suatu neoplasia sel otot polos. Tumor serupa telah dilaporkan pada organ berbeda pada beberapa spesies ikan seperti Carassius auratus (Çiltaş dan Hisar 2005 ; Oryan et al. 2015 ; Uma et al. 2024 ), Cyprinus carpio (Vergneau-Grosset et al. 2016 ), Dicentrarchus labrax (Iaria et al. 2020 ; Natale et al. 2020 ), Micropterus salmoides (Herman dan Landolt 1975 ), Mugil cephalus (Singaravel et al. 2016 ), Oncorhynchus tshawytscha (Lumsden dan Marshall 2003 ) dan Sardina pilchardus (Ramos dan Pelenteiro 2003 ). Semua laporan ini berasal dari ikan dewasa yang menunjukkan penyakit kronis atau tidak ada penyakit tergantung pada organ yang terpengaruh. Khususnya, Iaria dkk. ( 2020 ) menggambarkan leiomyoma lambung yang memengaruhi induk ikan bass laut Eropa. Dalam kasus tersebut, neoplasia terdeteksi selama pemeriksaan kesehatan rutin dan belum dikaitkan dengan penyakit. Dalam kasus kami, massa tersebut menyebabkan penyumbatan lambung, mengganggu asupan makanan dan oleh karena itu lokasi, bukan neoplasia itu sendiri, adalah kemungkinan penyebab penyakit tersebut.
Kasus ini merupakan laporan pertama tentang neoplasia yang terjadi pada ikan sturgeon Adriatik, A. naccarii , dan dapat memberikan informasi berharga untuk penelitian selanjutnya yang berfokus pada penyakit spesies ini. Lebih banyak laporan harus didorong untuk mengumpulkan informasi yang bermanfaat guna memperoleh pengetahuan yang lebih baik tentang penyakit yang menyerang ikan sturgeon. Sebagai kesimpulan, laporan ini merupakan contoh yang jelas tentang bagaimana menyelidiki bahkan satu spesimen ikan liar dapat memberikan hasil penting pada berbagai aspek ekologi.
