Abstrak
Tujuan
Penelitian saat ini menyelidiki tindakan hipnotis partisi metanol Albizia julibrissin (MPAJ) dan berbagai partisi (total, etil asetat, dan air) Melissa officinalis (MO) pada tikus.
Metode
Perpanjangan waktu tidur yang diinduksi pentobarbital (PIS) digunakan untuk menilai aksi hipnotis senyawa uji. Untuk studi toleransi, MO dan MPAJ diberikan sendiri atau dalam kombinasi selama 7 hari, dan kemudian aktivitas lokomotor tikus diukur sebagai indeks toleransi. Mortalitas ekstrak herbal dipelajari setelah pemberian intraperitoneal (ip) dan oral pada tikus.
Hasil
Pemberian ekstrak total Melissa officinalis dan ekstrak metanol Albizia julibrissin secara terpisah pada dosis 12,5 mg/kg secara signifikan meningkatkan waktu PIS. Pada kombinasi dua tanaman, tidak ada peningkatan tambahan atau sinergis dalam rasa kantuk jika dibandingkan dengan pemberian masing-masing tanaman secara terpisah ( p < 0,05). Berbeda dengan diazepam, aktivitas lokomotor hewan tidak berubah secara signifikan setelah 7 hari penyuntikan MPAJ atau ekstrak total MO (TEMO), atau kombinasinya.
Kesimpulan
Pemberian TEMO dan MPAJ secara terpisah memberikan efek hipnotis yang signifikan. Namun, kombinasi kedua ekstrak tersebut tidak menghasilkan aksi hipnotis yang sinergis atau aditif. Kurangnya efek aditif dapat disebabkan oleh kemungkinan interaksi oleh komponen kedua tanaman tersebut. Peningkatan angka kematian dan reaksi yang tidak diinginkan yang diamati setelah pemberian MPAJ secara ip mungkin disebabkan oleh penyerapan senyawa toksik tertentu yang biasanya tidak diserap setelah pemberian oral.
PERKENALAN
Tidur merupakan proses fisiologis mendasar yang bertujuan untuk memulihkan dan menyegarkan tubuh, yang mungkin rentan terhadap gangguan akibat beberapa keadaan seperti penyakit, stres, dan kebisingan lingkungan. Adanya masalah tidur kronis telah dikaitkan dengan beberapa konsekuensi kesehatan, termasuk berkurangnya waktu reaksi, gangguan fungsi memori, kesulitan dalam pengaturan emosi, dan perubahan dalam fungsi sistem kekebalan tubuh. 1 , 2
Beberapa obat sintetis seperti benzodiazepin, 3 non-benzodiazepin, 4 antidepresan, 5 dan antihistamin 6 telah digunakan untuk mengobati orang dengan gangguan tidur. Meskipun memiliki kekurangan seperti toleransi dan penghentian penggunaan, obat-obatan seperti benzodiazepin masih merupakan obat yang paling sering diresepkan. 7 Penggunaan ekstrak herbal semakin diminati oleh dokter maupun pasien sebagai terapi alternatif, terutama bagi orang dengan gejala kecemasan dan gangguan tidur ringan hingga sedang. 8
Lemon balm dengan nama ilmiah Melissa officinalis (MO) termasuk dalam famili Lamiaceae, tanaman asli Mediterania, Eropa selatan, Afrika utara, dan timur Kaukasus serta Iran utara.9,10 Lemon balm telah digunakan sejak zaman kuno sebagai obat penenang ringan, anti-kecemasan, dan hipnotis.11 Daun tanaman ini mengandung flavonoid, senyawa fenolik, dan aldehida monoterpenoid.12 Komponen – komponen ini dianggap bertanggung jawab atas sebagian besar khasiat lemon balm, terutama efek antioksidan dan efeknya yang dapat membantu tidur.11
Albizia julibrissin (AJ), yang umumnya dikenal sebagai pohon sutra Persia, memiliki bunga atau kulit kayu kering yang umumnya diolah untuk berbagai keperluan pengobatan. Berbagai efek farmakologis telah dilaporkan untuk AJ, mulai dari antidepresan dan ansiolitik, 13 antiperadangan, 14 antioksidasi, 15 dan antitumor. 16 Sementara efek farmakologis Albizia sendiri telah dipelajari dengan baik, kombinasinya dengan herbal lain belum diselidiki. Dalam sebuah penelitian terbaru yang menyelidiki efek dari berbagai partisi AJ untuk tindakan insomnia, kami menunjukkan bahwa partisi metanol dari tanaman tersebut menghasilkan induksi tidur yang lebih kuat daripada partisi lain yang diuji (Rabbani M, 2022, data tidak dipublikasikan). Untuk melanjutkan penelitian ini, kami bertujuan untuk mengevaluasi efek kombinasional dari partisi metanol AJ (MPAJ) dengan berbagai partisi MO pada waktu tidur yang diinduksi pentobarbital (PIS) pada tikus. Kombinasi herbal-herbal dapat menghasilkan manfaat terapeutik dan terkadang dengan kemanjuran yang lebih besar.
BAHAN DAN METODE
Reagen dan bahan kimia
Penelitian ini menggunakan bubuk natrium pentobarbital dari Sigma (Jerman, Lot 521 k1738) sebagai obat standar. Bahan kimia lainnya, termasuk Tween 80 (dari Merck, Jerman), etil asetat, metanol (dari Pars Chemi, Iran), etanol, heksana (dari Ashtalk dan Mojalli, Iran), ampul diazepam (Chemidarou, Iran), dan garam fisiologis (Darou Pakhsh, Iran), diperoleh dari pemasok lokal.
Bahan tanaman
Bunga AJ dikumpulkan dari provinsi Isfahan, Iran, pada bulan Mei 2021. Bagian atas MO dibeli dari Perusahaan Pakan Bazr (Isfahan, Iran). Identitas spesimen tanaman dikonfirmasi oleh Departemen Farmakognosi, dan spesimen voucher AJ (SAM-2494) dan MO (SAM-3295) didaftarkan dan disimpan di Herbarium Samsam Shariat, Fakultas Farmasi, Universitas Ilmu Kedokteran Isfahan, Iran.
Persiapan ekstrak
Sampel tanaman dikeringkan di tempat teduh dan kemudian digiling dengan penggiling listrik. Sampel bubuk AJ (1500 g) dan MO (1000 g) diekstraksi secara terpisah dengan metode maserasi menggunakan 5 L metanol: air (70:30) dan 5 L etanol: air (70:30), masing-masing, dengan pengadukan sesekali pada suhu kamar. Prosedur ekstraksi diulang tiga kali dengan interval 3 hari. Ekstrak yang dihasilkan (total ekstrak) dipekatkan hingga 1000 mL menggunakan evaporator vakum putar (Heidolph VV 2000, Jerman) di bawah tekanan rendah pada suhu 40–45°C.
Sebanyak 500 mL ekstrak total AJ pekat dipisahkan menjadi fase air dan heksana menggunakan dekanter. Prosedur diulang tiga kali dan akhirnya partisi heksana yang dihasilkan dikumpulkan. Lapisan air yang tersisa kemudian dipisahkan antara air dan etil asetat menggunakan prosedur yang sama. Prosedur tersebut diulang untuk ekstrak total MO, menghasilkan partisi etil asetat dan air. Partisi akhir dari kedua sampel tanaman dipekatkan dengan evaporator putar dan dikeringkan sepenuhnya menggunakan peralatan pengering beku. Partisi yang kering disimpan dalam lemari es hingga digunakan.
Hewan
Tikus Swiss jantan (25–30 g, umur 6 minggu) dikumpulkan dari rumah hewan Sekolah Farmasi (Isfahan, Iran) dan dipelihara dalam kelompok yang terdiri dari enam tikus per kandang dalam kondisi lingkungan standar berupa kelembapan, suhu, dan siklus terang/gelap. Persediaan makanan dan hidrasi yang cukup mudah diakses tanpa batasan. Semua metode yang dilakukan dalam penelitian hewan dilakukan sesuai dengan kriteria perawatan dan penggunaan hewan laboratorium sebagaimana ditetapkan oleh Komite Etik Nasional di Iran (Kode etik: IR.MUI.RESEARCH.REC.1400.479 ). Penelitian ini bertujuan untuk meminimalkan penderitaan hewan dan mengurangi jumlah hewan yang digunakan dalam pengujian. Eksperimen dilakukan selama periode terang, dan pengamatan perilaku dilakukan di ruangan kedap suara untuk mengurangi variasi diurnal. Hewan dipilih secara acak dan diaklimatisasi dengan kondisi laboratorium dengan dipelihara di kandangnya selama 5 hari sebelum pemberian dosis.
Perlakuan
Tikus menerima suntikan intraperitoneal (ip) tunggal berupa obat-obatan (diazepam, 2 mg/kg; sodium pentobarbital, 50 mg/kg), ekstrak tanaman (pada berbagai dosis), atau pembawa (garam normal), dan hanya diberikan untuk satu pengujian. Suntikan diberikan secara acak antara pukul 8:00 dan 13:00 untuk memperhitungkan fluktuasi tingkat aktivitas harian. Untuk setiap kelompok perlakuan, minimal enam tikus digunakan.
Penentuan kandungan fenolik total
Total kandungan fenolik ditentukan secara spektrofotometri menggunakan metode Folin–Ciocalteu, mengikuti prosedur yang diuraikan oleh Everette. 17 Total kandungan fenolik ditentukan menggunakan kurva standar berdasarkan berbagai konsentrasi asam galat (50–500 μg/mL dalam metanol). Absorbansi UV sampel dibaca pada 765 nm, dan hasilnya dinyatakan sebagai ekuivalen asam galat (miligram ekuivalen asam galat per gram) ekstrak kering.
Tes tidur yang diinduksi pentobarbital (PIS)
Uji induksi tidur didasarkan pada perpanjangan durasi tidur melalui penggunaan pentobarbital. Suntikan tunggal ip kendaraan, diazepam (2 mg/kg) atau partisi ekstrak diberikan 30 menit sebelum pentobarbital (50 mg/kg). Interval waktu antara suntikan pentobarbital dan timbulnya tidur (hilangnya refleks tegak) dan total durasi tidur (interval waktu antara tidak adanya refleks tegak dan perolehan refleks tegak) dicatat. 18
Tes aktivitas lokomotor (LAT)
Untuk menilai aktivitas lokomotor spontan, digunakan kandang gelap berbentuk persegi panjang berukuran 35 × 25 × 29 cm, yang dilengkapi dengan alat pelacak inframerah. Peralatan ini merekam dua parameter penting (jumlah gerakan dan waktu tempuh) selama tiga sesi observasi 5 menit, dengan total 15 menit, seperti yang dijelaskan oleh Rabbani dkk. (1995). Satuan hitungan aktivitas bersifat acak dan berdasarkan pada pemutusan berkas oleh gerakan tikus. Untuk menghitung mobilitas hewan, jumlah gerakan dikalikan dengan durasi gerakan. Tikus disuntik dengan berbagai zat: ekstrak tanaman, diazepam, atau pembawa (garam normal). Setelah interval 30 menit, tikus ditempatkan di kandang aktivitas untuk observasi. 19
Dosis mematikan pada 50% (LD 50 )
LD 50 ekstrak ditentukan dengan metode yang dijelaskan oleh Akhila et al., 20 dan Pedoman 423 21 dari Organisasi untuk Kerja Sama Ekonomi dan Pembangunan (OECD). Total ekstrak MO (TEMO) dan MPAJ diberikan secara terpisah melalui rute po dan ip. Berdasarkan penelitian kami sebelumnya, MO dan AJ pertama kali diberikan masing-masing pada 2000 dan 300 mg/kg. Setelah pemberian MO dan AJ secara oral, hewan diamati selama 30 menit, 4 jam, 24 jam, dan 14 hari, dan berat badan mereka dipantau. Setelah pemberian ekstrak ip, hewan diamati selama 30 menit, 4 jam, dan 24 jam untuk tanda dan gejala toksisitas. Prosedur yang sama digunakan untuk penentuan LD 50 dalam penelitian kombinasi.
Tes toleransi
Untuk menilai perkembangan toleransi terhadap ekstrak tumbuhan, aktivitas lokomotor digunakan. Ekstrak MO dan AJ sendiri atau dalam kombinasi diberikan (ip) selama 7 hari. Aktivitas lokomotor diukur menggunakan metode yang dijelaskan di atas 30 menit setelah dosis pertama dan pada hari kedelapan .
Analisis statistik
Hasilnya disajikan sebagai mean ± SEM. Untuk menganalisis data, para peneliti menggunakan analisis varians satu arah (ANOVA), diikuti oleh uji post hoc Tukey. Nilai P kurang dari 0,05 dianggap signifikan. Program perangkat lunak yang digunakan untuk analisis data adalah Graph Pad Prism 8.
HASIL
Kandungan fenolik total
Total kandungan fenolik ekstrak AJ dan MO diukur menggunakan kurva standar asam galat. Total kandungan fenolik MPAJ ditemukan sebesar 36,3 mg GAE/g dan untuk totalnya, partisi etil asetat dan air MO masing-masing sebesar 244,7, 419,3, dan 234 mg GAE/g.
Pengaruh ekstrak tumbuhan terhadap waktu tidur yang diinduksi pentobarbital
Uji PIS pada tikus merupakan metode farmakologis klasik untuk menyaring sifat sedatif dan hipnotik obat. Gambar 1 menunjukkan efek ekstrak diazepam, AJ, dan MO pada berbagai dosis terhadap waktu PIS. Diazepam yang diberikan pada dosis 2 mg/kg secara signifikan memperpanjang durasi tidur sekitar 2,5 kali lipat dibandingkan dengan kelompok kontrol ( p < 0,001 )
MPAJ pada dosis 12,5, 25, 50, dan 100 mg/kg secara signifikan meningkatkan waktu PIS masing-masing sebesar 73,95, 132,27, 135,46, dan 208,25% dibandingkan dengan kelompok kontrol ( p < 0,001, Gambar 1 ). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1 , dosis efektif minimum AJ adalah 12,5 mg/kg, dosis yang dipilih untuk studi kombinasi lebih lanjut.
Untuk menemukan konsentrasi efektif minimum ekstrak MO, partisi yang berbeda, yaitu, etil asetat, air, dan ekstrak total diperiksa. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1 , partisi etil asetat dan air MO hingga dosis 200 mg/kg tidak mengubah waktu PIS secara signifikan dan oleh karena itu dihilangkan dari studi kombinasi. Di sisi lain, ekstrak total, pada dosis 12,5 mg/kg secara signifikan ( p < 0,001, Gambar 1 ) meningkatkan durasi tidur sebesar 190,4% dan oleh karena itu dipilih untuk pemeriksaan lebih lanjut.
MPAJ pada dua dosis 12,5 dan 25 mg/kg dikombinasikan dengan dosis etil asetat, ekstrak air, atau ekstrak total MO yang dipilih. Kombinasi MPAJ pada salah satu dari dua dosis ini dengan partisi etil asetat atau ekstrak air MO tidak mengubah waktu PIS secara signifikan. Ketika MPAJ (pada 12,5 atau 50 mg/kg) dicampur dengan TEMO (12,5 atau 50 mg/kg), durasi tidur meningkat secara signifikan lebih dari dua kali lipat ( p < 0,001, Gambar 1 ) dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Pengaruh ekstrak tumbuhan terhadap aktivitas lokomotor spontan
Jumlah aktivitas lokomotor kumulatif yang mengukur aktivitas total selama perekaman 15 menit dilakukan untuk memeriksa pergerakan hewan setelah penyuntikan dosis ekstrak tumbuhan tertentu. Diazepam pada 2 mg/kg secara signifikan mengurangi mobilitas dibandingkan dengan kelompok kontrol sebesar 84,5% ( p < 0,001, Gambar 2 ). Dosis MPAJ tertentu pada 12,5 mg/kg dan TEMO secara signifikan mengurangi mobilitas hewan masing-masing sebesar 73,71% dan 31,66% dibandingkan dengan kelompok kontrol. Kombinasi MPAJ (12,5 mg/kg) dan TEMO (12,5 mg/kg) selanjutnya mengurangi mobilitas hewan sebesar 85,92% dibandingkan dengan kelompok kontrol ( p < 0,001, Gambar 2 ). Gambar 3 mengilustrasikan jumlah aktivitas lokomotor yang direkam pada tiga interval waktu: 5, 10, dan 15 menit. Data menunjukkan bahwa diazepam secara signifikan mengurangi aktivitas lokomotor di semua titik waktu. Lebih jauh lagi, senyawa MPAJ dan TEMO juga menyebabkan penurunan aktivitas lokomotor pada interval tersebut, meskipun pada tingkat yang lebih rendah dibandingkan dengan diazepam.
Toksisitas akut (LD50) ekstrak
Dosis rekomendasi pedoman uji OECD digunakan untuk menilai toksisitas oral dan ip MPAJ dan TEMO secara terpisah dan dalam kombinasi. Berdasarkan pedoman yang disebutkan di atas, TEMO dan MPAJ diberikan ip masing-masing pada 2000 mg/kg, dan hewan dipantau selama 30 menit pertama dan kemudian pada 4 dan 24 jam. Dosis 2000 mg/kg TEMO ditemukan cukup aman tanpa menyebabkan perubahan apa pun dalam perilaku hewan. Berdasarkan protokol di atas, LD 50 MPAJ ditentukan menjadi 25 mg/kg setelah 24 jam injeksi ip. Pemberian ip MOTE pada 2000 mg/kg dengan 5 mg/kg AJME aman tanpa kematian
Untuk studi toksisitas oral, TEMO dan MPAJ diberikan pada dosis 2000 mg/kg secara terpisah, dan hewan dipantau selama 30 menit pertama, 4 jam, 24 jam, dan 14 hari berikutnya. Kedua ekstrak tanaman, hingga dosis 2000 mg/kg, tidak menyebabkan kematian yang menunjukkan keamanan pemberian oral. Hasil serupa ditemukan ketika kedua ekstrak tanaman diberikan secara oral pada dosis 2000 mg/kg.
Studi toleransi
Untuk memeriksa perkembangan toleransi, setiap ekstrak tanaman atau kombinasinya diberikan melalui rute ip selama tujuh hari berturut-turut, dan kemudian aktivitas lokomotor diukur 30 menit setelahnya. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5 , pemberian diazepam pada 2 mg/kg selama 7 hari mengakibatkan perkembangan toleransi terhadap aktivitas lokomotor hewan. Berbeda dengan diazepam, pemberian MPAJ (12,5 mg/kg) atau TEMO (12,5 mg/kg) atau kombinasinya pada dosis ini tidak mengubah aktivitas lokomotor hewan secara signifikan setelah 7 hari (Gambar 5 ). Seperti yang diilustrasikan pada Gambar 6 , pengobatan tujuh hari dengan saline atau diazepam tidak menyebabkan perubahan signifikan pada berat badan hewan. Namun, pemberian MPAJ saja menyebabkan penurunan berat badan. Sebaliknya, ketika ekstrak MPAJ dikombinasikan dengan TEMO, tidak ada penurunan berat badan yang signifikan yang diamati
DISKUSI
Tujuan keseluruhan dari percobaan ini adalah untuk menentukan apakah efek hipnotis gabungan dari MPAJ dan TEMO memiliki efek hipnotis aditif atau sinergis. Untuk menilai efek hipnotis dari ekstrak ini, digunakan metode waktu PIS. Ini adalah pendekatan eksperimental yang terkenal di mana onset dan durasi tidur diukur dengan 50 mg/kg pentobarbital. Konsisten dengan penelitian sebelumnya dan seperti yang diantisipasi, diazepam secara signifikan memperpanjang waktu PIS yang mengonfirmasi validitas metode tersebut. 23
Sejauh pengetahuan kami, ini adalah studi pertama yang mempertimbangkan efek akut ekstrak AJ dan MO setelah pemberian ip pada PIS. MPAJ pada dosis minimum 12,5 mg/kg menyebabkan peningkatan dua kali lipat dalam durasi tidur yang diinduksi oleh pentobarbital tanpa secara nyata memperpendek latensi tidur. Dua flavonoid, yaitu quercitrin dan isoquercitrin yang diisolasi dari AJ telah diidentifikasi sebagai faktor utama untuk efek sedatifnya. 24 , 25 Komponen-komponen ini diperkirakan memberikan efeknya dengan meningkatkan kadar 5-HT. 25 Konstituen lain dari AJ adalah jolibroside C1, dengan efek anti-kecemasan dan pemicu tidur yang bekerja melalui reseptor benzodiazepin 5-HT 1A dan GABA A. 26
Di antara tiga partisi MO yang diuji di sini, ekstrak total memberikan sifat induksi tidur tertinggi dan karenanya dipilih untuk studi kombinasi lebih lanjut. Menurut data yang diperoleh dari uji pentobarbital, efek sedatif dari ekstrak total lebih jelas daripada ekstrak air dan etil asetat, yang menyoroti pentingnya seluruh konstituen tanaman dalam mencapai efek penuh. 27 Dosis minimum TEMO setelah pemberian ip di tangan kami adalah 12,5 mg/kg. Studi serupa yang dilakukan oleh Soulimani et al. juga menunjukkan efektivitas MO pada dosis rendah setelah pemberian ip pada tikus. 28
Studi kombinasi menunjukkan tidak adanya efek aditif atau sinergis dengan dosis yang berbeda dari MPAJ dan TEMO. Efek hipnotis dengan kombinasi dua ekstrak tidak lebih besar dari jumlah matematis masing-masing herba. Tidak adanya efek hipnotis tambahan dari kombinasi dua ekstrak mungkin disebabkan oleh faktor-faktor seperti kurangnya sinergi, saturasi reseptor, hasil yang berkurang, dan variabilitas individu dalam respons. Jika mereka menargetkan reseptor yang sama, saturasi dapat terjadi, membatasi respons lebih lanjut. Hasil yang berkurang mungkin juga berperan, karena peningkatan dosis menghasilkan manfaat tambahan yang lebih kecil. Selain itu, perbedaan farmakokinetik dapat mengurangi kemanjuran gabungannya, dan dosis yang tidak mencukupi dapat menghalangi potensi peningkatan efek.
Meskipun TEMO cukup aman pada dosis yang lebih tinggi, dosis MPAJ ip tampaknya beracun pada dosis di atas 25 mg/kg. LD50 MPAJ ditemukan sebesar 25 mg/kg dan keterbatasan ini membuat dosis tidak mungkin ditingkatkan dalam penelitian ini. Sebagai bagian dari penelitian, kami juga menyelidiki toksisitas tanaman setelah pemberian oral dan tidak menemukan kematian pada hewan hingga dosis MPAJ dan TEMO yang sangat tinggi. Perbedaan nyata dalam profil toksisitas MPAJ setelah pemberian ip dan oral dapat disebabkan oleh senyawa saponin yang ditemukan dalam AJ, khususnya julibroside J29-31, yang menunjukkan efek sitotoksik. Ketika diberikan ip, senyawa tersebut diserap dan memiliki efek di tempat suntikan. Namun, pemberian oral tidak menghasilkan penyerapan yang signifikan atau efek spesifik. Penelitian tentang senyawa ini pada spesies Albizia juga telah menyoroti sifat sitotoksik dan hemolitiknya setelah pemberian ip. 29 Fenomena ini juga telah dilaporkan pada tanaman lain. Misalnya, LD 50 untuk Albizia glaberrima 30 dan berberin 31 dilaporkan bervariasi setelah pemberian ekstrak secara ip dan oral.
TEMO pada dosis yang dipilih sebesar 12,5 mg/kg tidak mengubah aktivitas lokomotor hewan secara signifikan. Ini sesuai dengan temuan lain di mana pemberian MO secara oral terbukti tidak memiliki efek mendalam pada aktivitas lokomotor. 32 , 33 MPAJ, di sisi lain, memang mengurangi aktivitas lokomotor setelah injeksi ip ekstrak pada 12,5 mg/kg. Tidak seorang pun sebelumnya telah mempelajari efek akut MPAJ setelah pemberian ip pada aktivitas lokomotor. Pada spesies Albizia yang lain , injeksi ip ekstraknya telah terbukti mengurangi mobilitas hewan. 34 Menarik untuk dicatat bahwa, tidak seperti diazepam, tidak ada toleransi yang berkembang terhadap efek lokomotor MPAJ atau TEMO setelah 1 minggu injeksi ekstrak. Temuan serupa telah dilaporkan oleh Taiwo AE et al., setelah pemberian MO secara oral pada tikus yang diobati selama 10 hari. 32 Aktivitas lokomotor yang menurun tidak semata-mata disebabkan oleh efek sedatif dari senyawa tersebut; Faktor lain seperti relaksasi otot atau perubahan suhu tubuh dapat memengaruhi pergerakan hewan.
Hasilnya menunjukkan bahwa, tidak seperti TEMO, kelompok yang menerima MPAJ saja atau dalam kombinasi dengan MO menunjukkan tanda-tanda pengurangan aktivitas lokomotor. Mengenai berat badan, hewan yang diberi ekstrak AJ secara oral mengalami penurunan berat badan, sedangkan yang menerima kombinasi kedua tanaman tidak mengalaminya, yang bertentangan dengan hasil pemberian ip. Perbedaan ini mungkin disebabkan oleh perbedaan kapasitas penyerapan antara AJ dan MO, serta variasi genetika hewan dan metode pemberian. Perbedaan serupa dalam perubahan berat badan setelah pemberian oral dan ip telah diamati dalam penelitian. 35 Sebuah penelitian tentang tamoxifen juga menyebutkan bahwa pemberian obat secara oral menghasilkan lebih sedikit stres dan lebih sedikit efek samping pada hewan dibandingkan dengan pemberian ip, 36 yang mungkin menjelaskan pengamatan kami dalam penelitian ini juga.
KESIMPULAN
Kami menemukan bahwa suntikan akut MPAJ atau TEMO dengan dosis rendah 12,5 mg/kg memperpanjang waktu tidur yang disebabkan oleh pentobarbital. Namun, kombinasi kedua ekstrak tersebut tidak memberikan efek sedatif yang bersifat aditif atau sinergis. Potensi kombinasi ekstrak herbal dapat sangat bervariasi tergantung pada kombinasi spesifik herbal yang digunakan. Meskipun ekstrak herbal secara umum dianggap aman, menggabungkan beberapa herbal dapat meningkatkan risiko efek samping dan, dalam beberapa kasus, dapat berinteraksi satu sama lain dengan cara yang tidak terduga, yang menyebabkan efek nonaditif.
